線維化評価のゴールドスタンダード：Modified Ashcroft Score 完全ガイド

1. Ashcroft Score とは？

Ashcroft Score（アシュクロフトスコア）は、1988年にAshcroftらによって提唱された、肺組織の線維化の程度を半定量的に評価するための組織学的グレーディングシステムです。特発性肺線維症（IPF）をはじめとする間質性肺疾患の研究において、ブレオマイシン誘発肺線維症モデルなどの動物モデルの評価に最も広く用いられている「ゴールドスタンダード」です。

しかし、オリジナルのAshcroft Scoreには「評価者間でのばらつき（主観性）が大きい」という課題がありました。これを劇的に改善し、標準化したのが2008年にHubnerらによって発表された Modified Ashcroft Score（改変アシュクロフトスコア） です。現在、世界中のIPF非臨床試験や論文において、単に「Ashcroft Score」と記載されている場合でも、実際にはこのModified版が使用されていることがほとんどです。

2. Modified Ashcroft Score (Hubner et al., 2008) の0〜8段階基準

Modified Ashcroft Score は、線維化の重症度を 0から8の9段階 で評価します。評価は通常、マッソントリクローム染色（青く染まるコラーゲン）やヘマトキシリン・エオジン（H&E）染色が施された切片を用い、倍率100倍（または200倍）の顕微鏡下で全視野またはランダムな視野を複数評価して平均値を算出します。

スコア	重症度	組織学的な特徴・判定基準
0	正常	正常な肺組織。肺胞壁は薄く、線維化の証拠は全く見られない。
1	極小	個々の肺胞壁のわずかな肥厚。肺胞壁の構造自体は維持されている。
2	軽度	肺胞壁の明確な肥厚が見られるが、肺胞の構造障害（損傷）はない。線維化した束が形成され始めている。
3	中等度（初期）	肺胞壁の肥厚が進み、一部の肺胞構造へのダメージが見え始める。線維化の「塊（Mass）」には至らない。
4	中等度	単一の**線維性マス（Fibrotic mass）**が形成されている。肺胞構造の明確な損傷がある。
5	中等度（後期）	複数の線維性マスが存在するか、または全視野の**10%〜50%**が結合組織に置き換わっている。
6	重度（初期）	融合した巨大な線維性マスが見られ、全視野の50%超が結合組織に置き換わっている。正常な肺構造は大部分が失われている。
7	重度	大規模な線維化により、肺の構造の大部分が破壊されている。少数の変形した肺胞のみが残存している。
8	完全な線維化	視野全体が結合組織で完全に覆い尽くされ（全アブレーション）、正常な肺胞構造は全く確認できない。

[!NOTE] スコアリングの境界線（ルール・オブ・サム）

• Score 0-3: 肺の基本構造（肺胞）は維持されており、壁が厚くなっている段階。
• Score 4-5: 明確な「線維の塊（Mass）」が出現し、構造が壊れ始める段階。
• Score 6-8: 肺胞構造が失われ、結合組織（コラーゲン）に置き換わっていく段階。

3. 正確なスコアリングのためのガイドラインとコツ

3.1 評価のブラインド化（盲検化）

スコアの主観性を排除するため、評価者は必ずサンプル群（プラセボ群、治療群など）をブラインド化して評価を行う必要があります。少なくとも2名の独立した評価者によるスコアリングが推奨されます。

3.2 視野の選び方と平均化

1つのサンプル（スライド）に対して、ランダムに複数の視野（例：10〜20視野）を撮影して個別にスコアを付け、その平均値を算出します。

• 注意点: 大きな気管支や血管のみが写っている視野は、それ自体が結合組織を持っているため、実質的な肺胞の線維化評価から除外する必要があります。

3.3 染色の品質

Modified Ashcroft Scoreを正確に行うためには、コラーゲン線維を青暗色に染め出すマッソントリクローム（Masson's Trichrome）染色が最適です。細胞質（赤）とコラーゲン（青）のコントラストがはっきりしているため、線維化領域（Score 4以上のマスの判定）が容易になります。

4. Ashcroft Score の限界とデジタル定量（DIA）の併用

Ashcroft Score は非常に強力で世界標準のツールですが、いくつかの限界も存在します。

1. 非連続データ（順序尺度）であること: 0〜8の「段階」であるため、例えばScore 3と4の差と、6と7の差が生物学的に等価であるとは限りません。
2. 天井効果: Score 8に達した組織では、それ以上コラーゲンが沈着してもスコアは変動しません。
3. 微細な薬効の検出: 新薬候補がFVCの減少を数%抑制するような微小な効果を見る場合、段階的スコアでは検出力が足りないことがあります。

【解決策：デジタル画像解析（DIA）との組み合わせ】 現在、優れた前臨床論文やCROのレポートでは、Ashcroft Score（半定量的・構造的評価）と、コラーゲン面積率（CPA: Collagen Proportional Area）のデジタル定量（ImageJ等）（連続的・客観的評価）を併用することがスタンダードとなっています。

• Ashcroft Score: 線維化が肺の構造（アーキテクチャ）をどれだけ破壊しているかを評価します。
• デジタル定量 (CPA): 組織全体に対して絶対的なコラーゲンの量がどれだけ増減しているかを小数レベルで評価します。

これらを組み合わせることで、「コラーゲン量だけでなく、正常な肺胞構造も保護されている」という、より確固たる抗線維化エビデンスを構築できます。

参考文献

• Ashcroft T, Simpson JM, Timbrell V. Simple method of estimating severity of pulmonary fibrosis on a numerical scale. J Clin Pathol. 1988;41(4):467-470.
• Hübner RH, et al. Standardized quantification of pulmonary fibrosis in histological samples. BioTechniques. 2008;44(4):507-517. PMID: 18361792